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5.2 CEPAS
5.2.1 Identificação de Microrganismos
Desde a descoberta dos microrganismos há alguns séculos, vêm se buscando novas maneiras de identificar
as bactérias. Neste item serão abordados alguns métodos que auxiliam na identificação de microrganismos.
5.2.1.1 Coloração de Gram
Ométodo de coloração de Gram permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a
partir das colorações que estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos.
O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o Corante
Primário (cristal violeta) seguido de tratamento com um fixador, o lugol. Tanto bactérias Gram-positivas
quanto Gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma
coloração violeta devido à formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus citoplasmas.
Segue-se o tratamento com um solvente orgânico, o etanol-acetona (1:1 v:v). O solvente dissolve a
porção lipídica das membranas externas das bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é
removido, descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das
bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos poros do peptidoglicano, tornando-as impermeáveis
ao complexo; o corante primário é retido e as células permanecem coradas. Em seguida, a amostra é
tratada com um corante secundário, a fucsina básica.
Quando se observa no microscópio as bactérias que adquirem a coloração azul violeta são chamadas de
Gram-positivas e aquelas que adquirem a coloração vermelho são chamadas de Gram-negativas.
Imagem 03:
Microscopia óptica de bactérias
Gram-positivas
e
Gram-negativas
Fonte: Avisa
Bactérias Gram-positivas
Bactérias Gram-negativas
