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Após período de incubação determinado, lavar os repiques com meio de cultura TSB acrescido de 15%
glicerol (solução crioprotetora) que evitará o rompimento das células durante o processo de congelamento.
Transferir no mesmo dia da preparação, aproximadamente de 1 a 2 ml (não mais que 2/3 do volume
do tubo) da suspensão para cryovials. Identificar cada cryovial com nome do microrganismo, número de
ATCC, data da preparação e data de expiração.
Realizar preparado em quarentena até que os testes estejam concluídos. Se a pureza controle de pureza
e identificação da cultura de um dos cryovials preparados, e manter o restante da cultura for confirmada
(>90%), estocar em Ultrafreezer a temperatura de -70ºC. Caso a pureza da cultura não seja satisfatória
(<90%), todos os cryovials devem ser descartados conforme procedimento de descarte de resíduos com
risco microbiológico de cada laboratório.
Descongelamento do Cryovial
Retirar o Cryovial do Ultrafreezer e colocá-lo em incubadora a 30-35ºC aproximadamente de 30 a 60
minutos ou até que descongele o conteúdo. Não é permitido congelar novamente uma vez descongelado
o cryovial.
Para a obtenção das 3ª, 4ª gerações proceder da mesma maneira citada acima, com exceção da 5ª geração
que só poderá ser usada nos testes microbiológicos e não poderá utilizada no preparo de uma nova
geração sendo então descartada após seu uso conforme procedimento de descarte de resíduos com risco
microbiológico de cada laboratório.
Figura 02:
Descongelamento de Cryovial
3ª G
ERAÇÃO
4ª G
ERAÇÃO
5ª G
ERAÇÃO
ATCC
G
ARRAFA
DE
R
OUX
2ª G
ERAÇÃO
1ª G
ERAÇÃO
C
ULTURA
DE
T
RABALHO
I
DENTIFICAÇÃO
CEPA
2ª G
ERAÇÃO
2ª G
ERAÇÃO
2ª G
ERAÇÃO
2ª G
ERAÇÃO
E
STOQUE
-70º C
