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Figura 01:
Repique de Cepas de Referência
Criogenização de cepas
De acordo comUSP 37-NF 32 capítulo 1117 pode-se realizar a criogenizaçãodas culturasmantendo congelada
a temperatura de até -70 ºC. A partir desta técnica as células são mantidas em seu estado viável por um
período de tempo indefinido. Estas culturas criogenizadas podem ser usadas como cultura de trabalho.
É importante ressaltar que uma vez retirado do Ultrafreezer, o cryovial (tubo), não pode ser novamente
congelado.
Preparação de Cryovials
Após crescimento da cultura de 1ª Geração, lavar os tubos ou placas com solução salina (bactérias e leveduras)
ou solução salina acrescida de 0,05% de Tween 80 para fungos filamentosos, exemplo Aspergillus brasiliensis.
Para obter a 2ª Geração, repicar a suspensão acima com loop descartável em tubo inclinado, placas ou
garrafa de Roux e incubar conforme tabela abaixo:
Tabela 10:
Repique de Cepas
Microrganismo
Temperatura
de Incubação
Tempo
de Incubação
Meio de
Cultura
Bactéria
30 - 35ºC
21 ± 3 horas
TSA
Leveduras
20 - 25ºC
48 ± 4 horas
SDA
A. brasiliensis
20 - 25ºC
6 - 10 dias
SDA
Legenda: TSA* = meio de cultura Trypticase Soya Agar; SDA ** = meio de cultura Saboraud Dextrose Agar
C
ULTURA
DE
REFERÊNCIA
I
DENTIFICAÇÃO
CEPA
C
ULTURA
ESTOQUE
I
DENTIFICAÇÃO
CEPA
C
ULTURA
DE
T
RABALHO
2
A
8ºC
2ª G
ERAÇÃO
1ª G
ERAÇÃO
ATCC
3ª G
ERAÇÃO
4ª G
ERAÇÃO
5ª G
ERAÇÃO
