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5.2.1.2 Coloração de
Wirtz-conklin
A parede dos esporos constitui uma barreira eficaz contra a entrada e saída de materiais do esporo, mas
por sua impermeabilidade, geralmente é refringente e de difícil coloração. A exposição prolongada ao
corante verde malaquita, associado ao aquecimento, permite a penetração do corante e a coloração
do esporo por um verde intenso. Como contraste (contracorante), utiliza-se a safranina, que cora outras
estruturas em vermelho, facilitando a diferenciação dos esporos.
5.2.1.3 Kits de Identificação
Estes kits consistem na realização de provas bioquímicas que auxiliam a identificação de bactérias.
5.2.2 Manutenção de cepas
Neste item serão abordados métodos aplicados à manutenção das cepas utilizadas em testes
microbiológicos e como assegurar sua qualidade desde o recebimento, armazenamento, reconstituição,
crescimento, estocagem e controle de pureza para serem utilizadas nos métodos microbiológicos.
Culturas de referência
As culturas de referência consistem em microrganismos classificados por gênero e espécie, catalogados e
descritos de acordo com suas características e origem (ISO 11133-1:2000).
Devem ser adquiridos de Centro de Referência como: ATCC (American Type Culture Collection), NCTC
(National Collection of Type Cultures), INCQS (Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde),
NBRC (NITE Biological Resource Center), NCIMB (National Collection of Industrial Bacteria), NCPF
(National Collection of Pathogenic Fungi), IMI (International Mycological Institute), UKNCC (United
Kingdom National Culture Collection), CIP (Collection de l’Institut Pasteur) e NCYC (National Collection of
Yeast Cultures).
Para a reconstituição das culturas de referência é recomendado seguir as instruções do fornecedor, que
determina meios de cultura e tempos de incubação ideais.
Preparo do microrganismo a partir do liofilizado (cultura de referência):
Em fluxo laminar ou diante de bico de Bunsen, pipetar solução salina estéril para reidratar o liofilizado.
Em seguida, transferir o conteúdo para um tubo de ensaio contendo meio de cultura recomendado pelo
fornecedor. Esta primeira passagem (repique) refere- se a 1ª Geração. É definida como uma geração, cada
vez que o microrganismo é transferido para um novo meio de cultura.
