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7 MÉTODOS
MICROBIOLÓGICOS
Neste capítulo serão abordados métodos de análises microbiológicas em produtos acabados e matérias-
primas utilizados em produtos de HPPC.
7.1 PLAQUEAMENTO
Existem 2 tipos de plaqueamento: plaqueamento em profundidade e plaqueamento por semeadura em
superfície.
O plaqueamento por profundidade consiste em adicionar a amostra diluída, distribuir o meio de cultura
fundido em placa de Petri esterilizada até que se obtenha uma camada de no mínimo 3 mm a 4 mm
(por exemplo, para placa de 90 mm de diâmetro, 15 mL a 20 mL de ágar são normalmente requeridos)
homogeneizar rapidamente fazendo círculos com a placa. Aguardar o resfriamento e solidificação do ágar,
colocando as placas de Petri em uma superfície horizontal e temperatura ambiente.
O plaqueamento por semeadura em superfície consiste em distribuir o meio de cultura fundido em placa
de Petri esterilizada até que se obtenha uma camada de no mínimo 3 mm a 4 mm (por exemplo, para placa
de 90 mm de diâmetro, 15 mL a 20 mL de ágar são normalmente requeridos). Aguardar o resfriamento
e solidificação do ágar, adicionar a amostra diluída e semeia-se com o auxílio de um “loop” ou alça de
Drigalsky proporcionando completa absorção da amostra no Agar.
7.2 CONTAGEM DE MESÓFILOS AERÓBIOS TOTAIS
Método de plaqueamento em profundidade.
Para a contagem total de microrganismos, usualmente, a preparação inicial é a primeira diluição contada.
Se necessário, diluições seriadas adicionais (por exemplo, diluição 1:10 podem ser aplicadas a partir da
preparação inicial. Adicionar 1mL da preparação inicial e/ou diluição da amostra preparada em placas
de Petri de 90 mm de diâmetro. Verter 15 mL a 20 mL de Agar fundido (TSA - bactéria e SDA – fungos)
mantido em banho-maria por não mais que 48ºC. Misturar a preparação inicial e/ou diluição da amostra
diluída com o meio homogeneizado cuidadosamente por meio de movimentos rotativos ou inclinação de
forma suficiente para dispersão. Aguardar a solidificação do meio de cultura sobre superfície horizontal
em temperatura ambiente.
Método plaqueamento por semeadura em superfície
Adicionar de 15 mL a 20 mL de Agar fundido mantido (TSA- bactéria e SDA – fungos) em banho-maria por
