72
quantidades de 50 ou 100g ou mL, pois evita-se o ressecamento e a preservação das características do
produto durante a incubação de 28 dias.
Em todos os métodos, o inóculo é de 1%, que proporciona uma diluição de 1/100 do inóculo preparado.
Ou seja, se o inóculo foi preparado na população de 10
8
UFC/mL ou g, a quantidade de microrganismos
inicial do Challenge será de 1/100 da população do inóculo, 10
6
UFC/mL ou g. Portanto a maioria dos
métodos preconizam que o inóculo seja diluído adequadamente, e semeado por plaqueamento para a
obtenção da quantidade exata de microrganismo inoculado em cada teste, que é a população inicial.
Os níveis de contaminação inicial nos produtos, são aqueles que atinjam, pelo menos:
• 1x10
6
UFC de bactérias por grama de produto
• 1x10
5
UFC de leveduras por grama do produto
• 1x10
5
UFC de esporos de fungos por grama do produto
7.4.4 Homogeneização e armazenagem das amostras inoculadas
Ahomogeneizaçãodos frascos deve ser de forma a fornecer uma distribuição uniforme dosmicrorganismos
nas amostras. Portanto, embora descrito como “homogeneizar bem”, esta etapa deve ser feita
manualmente, utilizando espátulas que melhor se adequem, de forma a atingir a amostra em todos os
cantos do frasco, assegurando uma boa homogeneização.
7.4.5 Validação do neutralizante utilizado no teste
A validação do neutralizante é de suma importância no teste de desafio do sistema conservante Challenge
Test, pois se não for adequadamente neutralizado, o conservante continua agindo durante o período de
análise microbiológica, levando a contagens errôneas ou mesmo ausência de crescimento nas placas de
Petri, causando falsos resultados de eficácia antimicrobiana.
Resumidamente, a validação do neutralizante é realizada em tubos de ensaio, colocando-se a mesma
alíquota do microrganismo diluído em contato na solução neutralizante assim como no neutralizante
acrescido do produto teste.
Estas duas condições testadas não devem resultar em diferença significativa de contagem entre si,
imediatamente após contato (T
0
) ou mesmo após decorrido um intervalo de tempo, geralmente de 10
a 15 minutos (T). Embora estas duas condições sejam as mais usadas para a validação da neutralização,
recomenda-se a inclusão de um tubo com diluente universal (Controle do Inoculo), e um tubo com o
produto contendo o antimicrobiano (Controle).
