80
• Em outro tubo de ensaio, 9 mL de água estéril recebe 1mL do inoculo, como o Controle;
• Estas misturas são homogeneizadas e mantidas a 35± 2ºC por 5 minutos;
• Após a incubação, 0,1mL de cada mistura é diluída em 9,9mL de caldo neutralizante e
homogeneizadas (população presumida de 10 a 100 UFC/mL);
• 1 mL do conteúdo de cada tubo é plaqueado, em duplicata, pela técnica de
pour plate
em Ágar
TSA;
• As placas são incubadas a 35± 2ºC por 48 horas;
• Após incubação as quantidades de UFC obtidas são enumeradas.
A ausência de toxicidade do neutralizante é confirmada se a média das contagens obtidas nas placas de
neutralizantes for igual à média das contagens do tubo Controle, ou seja, (Log
10
± 0,5).
7.7.2.2 Eficácia da Neutralização
A capacidade do caldo neutralizante usado no ensaio para inativar os efeitos do agente antimicrobiano
presente na amostra é verificada da seguinte maneira:
• Em 4,9 mL do produto teste é adicionado 0,1 mL de água estéril;
• Esta mistura é homogeneizada e incubada em banho-maria a 35± 2ºC por 2 minutos;
• Após a incubação, é retirada uma alíquota de 0,1mL e colocado em um tubo contendo 9,8 mL de
caldo neutralizante;
• O tubo é homogeneizado e mantido a 35± 2ºC por 5 minutos;
• Após a incubação, é adicionado 0,1 mL do inoculo contendo 10
4
a 10
5
UFC/mL;
• Caso esta verificação for realizada ao mesmo tempo com o teste de toxicidade do neutralizante,
o Controle poderá ser o mesmo para ambos os testes. Caso contrário, adicionar o tubo Controle;
• O tubo é homogeneizado e mantido a 35± 2ºC por 30 minutos;
