81
• Após o tempo de contato, é transferida uma alíquota de 0,1 mL em 9,9 mL de água estéril;
• 1 mL do conteúdo do tubo foi plaqueado, em duplicata, por pour plate, com Ágar TSA;
• As placas são incubadas a 35± 2ºC por 48 horas;
• Após incubação as quantidades de UFC obtidas são enumeradas.
A eficácia da neutralização é confirmada se a média das contagens obtidas nas placas de neutralizantes
forem iguais à média das contagens do tubo Controle, ou seja, (Log
10
±0,5).
7.7.3 Avaliação da Atividade Antimicrobiana da amostra
Resumidamente, as etapas de teste realizadas com as amostras são:
• 49 mL da amostra foram inoculadas com 1mL da suspensão padrão de microrganismos-teste,
contendo 10
8
a 10
9
UFC/mL, que caracteriza uma suspensão densa de microrganismos. No caso
de fungos filamentosos e leveduras, a contagem é de 10
6
a 10
7
UFC/mL;
• A mesma quantidade de inoculo deve ser transferida para 49 mL de água estéril, sendo este o
controle do inoculo. A contagem desta amostra fornece a população inicial do teste;
• As amostras inoculadas são mantidas à temperatura controlada de 35± 2ºC. Após a inoculação,
homogeneizar vigorosamente e retirar imediatamente uma alíquota de 0,1 mL da amostra
inoculada, transferindo-a para um tubo contendo 8,8 mL de caldo neutralizante + 1,1 mL de
água. Esta é a amostra denominada de “coleta no tempo imediato”, (TI);
• Ao atingir cada tempo de contato pré-determinado, sendo eles 1, 2, 3 e 5 minutos, são coletadas
as amostras referentes a cada um dos tempos de contato, procedendo-se de forma similar.
Diferentes tempos são utilizados, dependendo dos objetivos do teste;
• Ao final da coleta do último tempo, os tubos são incubados a 35± 2ºC por 5 minutos;
• Após este período cada umas das amostras são submetidas à diluição decimal, e plaqueadas por
pour plate
em ágar TSA;
• As placas são incubadas a 35± 2ºC por 48 horas;
